- Parámetros relacionados con características intrínsecas de la célula, como su tamaño y la complejidad de su núcleo y citoplasma. El citometro las detecta por medio de las señales de dispersión. La dispersión resulta de la interacción de la luz con una partícula que produce un cambio de dirección en todas las direcciones del espacio y son 2:
- Parámetros relacionados con características antigénicas de cada célula (inmunofenotipo), por medio del uso de fluorocromos.
Un fluorocromo es una molécula química que absorbe luz a una determinada longitud de onda (energía) y emite a una longitud superior (menor energía). Cuando un fluorocromo interacciona con la luz de excitación procedente del láser emite energía radiante. Los citómetros de flujo permiten detectar señales de fluorescencia procedentes de complejos Antigeno/Anticuerpo marcados con un fluorocromo y situados en una célula, siendo la cantidad de señal de fluorescencia emitida igual a la proporción de la cantidad de componentes fluorescentes de la partícula. Con el uso de fluorocromos se puede detectar hasta 3 colores con un mismo laser. (FL1 verde, FL2 naranja/rojo y FL3 rojo)
De forma esquemática, las células teñidas con anticuerpos monoclonales entran en la cámara de flujo de una en una y, al pasar por delante de un haz de luz de láser, emiten una luz fluorescente y dispersada, que es separada de acuerdo a su longitud de onda por apropiados filtros y espejos. Estas señales luminosas son recogidas por detectores y la información se integra y analiza adecuadamente por un sistema informático.
Formas para mostrar los datos:
HISTOGRAMA.- Muestra uno o más parámetros, como una distribución de frecuencias (256 o 1024 canales) Muestra cuantas células estan marcadas con cierto color/fluoroforo, y las distintas intensidades de fluorescencia de cada una.
DOT PLOT.- Muestra correlación de datos de dos parámetros en una resolución de 256x256, y cada punto representa una celula individual. Se dividen en general en los 4 cuadrantes. Tambien podemos mostrar el porcentaje de células de cada uno de los cuadrantes
DENSITY PLOT.- Muestra dos parámetros como la distribución de frecuencias. El color se utiliza para codificar las diferentes frecuencias de los acontecimientos.
CONTOUR PLOT.- Como un gráfico de puntos, un gráfico de contorno muestra los datos de correlación de los dos parámetros, con líneas de contorno que une puntos de igual elevación (distribución de frecuencias).
